Efeitos da manutenção in vitro sobre a biologia de cepas de Leishmania infantum pertencentes a genótipos distintos.voltar para a edição atual

Recentemente foi relatada uma deleção genômica de 12kb no cromossomo 31 de cepas de Leishmania infantum que circulam em Minas Gerais e no Piauí. Diferentes resultados obtidos sugerem que essa deleção genômica possa ser uma das razões das variações epidemiológicas observadas na leishmaniose visceral no Brasil. De fato, resultados preliminares obtidos do projeto principal onde esta proposta se insere demonstraram importantes diferenças biológicas in vitro entre as cepas que apresentam a deleção - aqui chamadas de deletadas (DEL) e aquelas sem a deleção (NonDEL). Apesar da evidência gerada pelos resultados, uma crítica relevante à metodologia se faz presente: todos os ensaios realizados utilizaram cepas que, desde a coleta, foram isoladas e criopreservadas para estoque em coleção biológica (Coleção de Leishmania do IOC - CLIOC); e que para o trabalho foram descongeladas e mantidas em cultura por mais de vinte passagens até a realização dos ensaios. Isso significa que os parasitas foram submetidos a condições muito diferentes daquelas que ocorrem na infecção natural. Essa constatação é de grande importância, especialmente para um projeto que visa gerar conclusões em laboratório que norteiem ações práticas de vigilância e controle da leishmaniose visceral em campo. Diante disso, o objetivo geral desse sub-projeto é monitorar possíveis efeitos da criopreservação e manutenção in vitro de cepas DEL e NonDEL sobre os parâmetros relevantes para o projeto principal. Para tal iremos trabalhar com cepas recém isoladas de forma a controlar todo o processo a que elas serão submetidas em laboratório. É notória a plasticidade genômica apresentada por Leishmania, com consequente alterações na transcrição e tradução de proteínas. Sendo assim, o parasita mantido in vitro pode, através da seleção a que é submetido, ser biologicamente e geneticamente muito diverso daquele que circula nos hospedeiros naturais, representando um viés aos estudos realizados. Nossa proposta visa compreender o quanto a manutenção do parasita em laboratório pode comprometer os resultados através da avaliação de parâmetros biológicos de cepas submetidas às condições laboratoriais de cultivo. Os resultados gerados serão essenciais tanto para o projeto principal como para grande parte dos estudos em leishmnanioses que fazem uso de ensaios de infecção em macrófagos e em modelos animais utilizando cepas mantidas em laboratório. Nossa hipótese é que as condições de manutenção e número de passagens das cepas utilizadas podem afetar significativamente os resultados, justificando a geração de conhecimento sobre tais efeitos.