Estudo químico e biológico de plantas visando a descoberta de extratos com atividade antiprotozoária contra Trypanosoma cruzi, Leishmania amazonensis e antitumoral contra linhagem celular derivada de adenocarcinoma de próstata humana (LNCaP-FGC )voltar para a edição atual

Buscando contribuir para o conhecimento do potencial antiprotozoário e antitumoral de espécies vegetais ocorrentes no Brasil, este projeto visa detectar extratos ativos contra T. cruzi, L. amazonensis e linhagem de células de adenocarcinoma de próstata (LNCaP), assim como realizar o fracionamento químico biomonitorado de um extrato bioativo selecionado. O objetivo geral deste trabalho será realizar a bioprospecção de extratos de espécies vegetais visando à descoberta de extratos ativos contra T. cruzi, L. amazonensis e linhagem de adenocarcinoma de próstata humano (LNCaP) assim como realização do estudo químico. Como objetivos específicos: Treinamento sobre o Sistema da Qualidade e Biossegurança (SQB) e nos POP´s pertinentes ao grupo de pesquisa QPNB e da Plataforma de Bioprospecção P09-001; aquisição de conhecimentos científicos relacionados a técnicas, aparelhagens, vidrarias e equipamentos de um laboratório de química de produtos naturais; treinamento em técnicas laboratoriais de pesagem, pipetagem, e evaporação de solventes; preparo de amostras e soluções para ensaios biológicos; aquisição de conhecimentos científicos relacionados a técnicas cromatográficas modernas; treinamento em técnicas cromatográficas (CCD, CLAE, CG) para a realização do fracionamento do extrato bioativo selecionado; treinamento e execução da manutenção de cultivo celular; treinamento e execução do ensaio com MTT para avaliação da proliferação celular em linhagem de adenocarcinoma de próstata (LNCaP); escrita de relatórios e apresentações orais. Para atingir os objetivos serão realizadas as seguintes metodologias: Treinamento no SQB A estudante participará do treinamento online oferecido pela equipe do SQB e posteriormente será avaliada online por meio de uma prova de múltipla escolha. Uma vez permitido o trabalho presencial, a estudante será treinada nos POPs pertinentes ao desenvolvimento do projeto. Aquisição de conhecimentos científicos Serão disponibilizados à estudante bibliografias pertinentes às técnicas desenvolvidas em um laboratório de química e os temas serão discutidos de forma a propiciar o aprendizado. Treinamento em técnicas e equipamentos Serão realizadas demonstrações das técnicas e operação dos equipamentos e posterior treinamento para que a estudante possa executar as técnicas com segurança. Preparo de amostras e soluções para ensaios biológicos Os extratos vegetais diluídos em DMSO 95% aq. serão aliquotados em placas de 96 poços na concentração de 20 mg/mL para realização da etapa de triagem nos ensaios in vitro antiprotozoário contra T. cruzi e L.a amazonensis; e ensaio antitumoral contra linhagem de adenocarcinoma de próstata humano (LNCaP). Fracionamento do extrato bioativo selecionado Para o fracionamento serão utilizadas técnicas cromatográficas apropriadas como a cromatografia líquida de alta eficiência em escala analítica (CLAE) e preparativa. As fases estacionárias e os eluentes serão definidos a partir de análises por CCD e CLAE. Serão obtidos perfis químicos do extrato bioativo selecionado empregando a técnica de CG-EM. Manutenção do cultivo de células A linhagem celular tumoral de próstata (LNCaP) será cultivada com meio RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino, a 37 °C com 5% de CO2. Para o desenvolvimento dos experimentos, as células serão desprendidas dos frascos, centrifugadas e ressuspendidas em meio RPMI-1640 suplementado com SFB, para posterior repique celular ou plaqueamento em microplacas de 96 poços. Ensaio do MTT para avaliação da proliferação celular As microplacas serão incubadas por 24 h e posteriormente serão expostas ao tratamento com as amostras. Em seguida, serão adicionados aos poços 20 µL de uma solução de MTT. As placas serão novamente incubadas, serão adicionados 150 µL de dimetilsulfóxido (DMSO) em todos os poços, e serão homogeneizadas para completa dissolução dos cristais de formazana gerados. As absorbâncias serão mensuradas no ? 590 nm em um leitor de microplacas.