Avaliação da indução da atividade pró-autofágica na carga micobacteriana em macrófagos: avaliação pré-clínica in vitrovoltar para a edição atual

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica que pode se manifestar em diferentes formas clínicas. No polo lepromatoso (LL), os pacientes apresentam múltiplas lesões de pele e são encontrados macrófagos altamente parasitados. Por outro lado, pacientes do polo tuberculoide (TT) podem apresentar lesão única de pele e raros bacilos são encontrados. Estudo anterior de nosso grupo demonstrou que há um bloqueio na autofagia dependente de beclina-1 em macrófagos presentes nas lesões de pele de pacientes LL quando comparados aos pacientes BT e que Mycobacterium leprae (M. leprae) é capaz de inibir o fluxo autofágico em macrófagos in vitro, o que pode ser revertido após o tratamento com IFNg ou Rapamicina. Em pacientes LL que desenvolveram episódios de reação reversa, uma condição clínica inflamatória aguda associada ao aumento das concentrações plasmáticas de IFNg, a ativação da autofagia foi restaurada. Também foi demonstrado que a morte de M. leprae em macrófagos humanos foi associada com o direcionamento da micobactéria para a autofagia e o bloqueio da via autofágica nas células infectadas foi capaz de restaurar a viabilidade da bactéria. Em conjunto, esses dados contribuem para uma maior compreensão dos mecanismos de controle micobacteriano associados aos pólos lepromatoso e tuberculóide, o que pode levar ao estabelecimento de novos alvos e estratégias terapêuticas de controle da hanseníase. Outros fármacos e suplementos nutricionais podem induzir a autofagia, como por exemplo, Verapamil, estatinas, Metformina, Resveratrol, vitamina D e ômega. O efeito pró-autofágico do Verapamil em pacientes com hanseníase ainda não foi investigado, deste modo, o objetivo geral desse projeto é investigar a capacidade deste fármaco em induzir a morte de M. leprae em macrófagos humanos, através da ativação da autofagia. Para alcançar esse objetivo, células THP1 ou mácrofagos derivados de monócitos humanos isolados pela técnica de Ficoll-Paque serão estimulados in vitro com M.leprae vivo e/ou diferentes concentrações do fármaco verapamil. A indução de autofagia será avaliada por duas metodologias distintas: microscopia e western blotting através da marcação de LC3. Nossa premissa é que esta substância sem função antimicrobiana descrita possa exercer essa atividade através do direcionamento de M. leprae para autofagia e consequentemente para a degradação e morte nos autofagolisossomos.