Identificação e desenvolvimento de novos antígenos recombinantes para o diagnóstico sorológico da leishmaniose tegumentarvoltar para a edição atual

Justificativa e relevância A leishmaniose tegumentar (LTA) é uma infecção mucocutânea caracterizada como doença negligenciada, responsável por mais de 90% dos casos de leishmaniose no Brasil [1]. O diagnóstico precoce é uma das formas de contenção da doença [2]. O diagnóstico parasitológico da LTA é considerado padrão ouro e envolve a detecção de formas intracelulares em amostras de raspagens, aspirados e impressão de fragmentos de lesões por coloração em lâminas fixadas. Este é um método invasivo e de precisão instável, dependente de fatores como período de infecção, qualidade de coleta das amostras e experiência do técnico responsável, apresentando ainda sensibilidade insatisfatória, de 43 a 70% [3]. Proteínas recombinantes, têm sido aplicadas ao melhoramento de testes sorológicos como alternativa aos testes utilizados, normalmente aplicados a ensaios de ELISA e têm demonstrado maior sensibilidade (95-100%) em relação a antígenos solúveis de Leishmania, que apresentam variações de sensibilidade de 1 - 97% [4]. Uma alternativa é o desenvolvimento de um teste sorológico baseado em proteínas quiméricas recombinantes, fáceis de incorporar e de baixo custo, a partir da seleção de epítopos. Para Leishmaniose Visceral, uma proteína quimérica (Q5) utilizada na plataforma de ELISA apresentou sensibilidade alta (82%) para soros de humanos, tornando a estratégia de genes quiméricos uma alternativa eficaz para diagnostico [5]. O uso de antígenos recombinantes tem mostrado estabilização na precisão dos resultados em testes imunoenzimáticos para LTA, além disso simplificam processos de obtenção e padronização. Logo, o projeto busca a identificação e utilização de epítopos alvos para criação de proteína quimérica e sua utilização em teste rápido. Objetivos 1 Pesquisar proteínas recombinantes na literatura para elaboração de proteína quimérica rica em peptídeos para células B; 2 Identificar antígenos a partir do extrato bruto de L. braziliensis; 3 Produzir antígenos recombinantes e quiméricos; 4 Avaliar a eficiência no diagnóstico sorológico; Metodologia Será feita a pesquisa na literatura de proteínas recombinantes com sensibilidade e especificidade alta (>90%) para soros de pacientes com LTA, que serão submetidas a análises de predição através de bioinformática, visando identificar possíveis peptídeos antigênicos para formação de uma proteína quimérica. Após a construção dos genes quiméricos eles serão enviados para síntese química comercial. Em seguida, os genes serão subclonados em vetores de expressão (pRSETa e/ou pGEX-TEV) para produção das proteínas quiméricas, onde vão ser avaliados as melhores condições de expressas dessas proteínas. As melhores proteínas expressas serão purificadas por cromatografia de afinidade e avaliadas por ensaios de Western-Blot com soros de pacientes com LTA. As proteínas que tiverem o melhor reconhecimento com os soros de pacientes serão sensibilizadas em placas de 96 poços e avaliadas por ELISA para verificação da sensibilidade e especificidade das proteínas quiméricas. Referências [1] VASCONCELOS, Jairla Maria et al. Revista Brasileira de Análises Clínicas, [S.L.], v. 50, n. 3, p. 221-227, nov. 2018. Revista Brasileira de Análises Clínicas [2] Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Manual de vigilância da leishmaniose tegumentar. Brasília: Ministério da Saúde; 2017 [3] BRITO, Rory Cristiane Fortes de et al. Applied Microbiology And Biotechnology, [S.L.], v. 104, n. 19, p. 8105-8116, 26 ago. 2020. Springer Science and Business Media LLC. [4] ZANETTI, A. S. et al. Revista do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo, v. 61, p. 1-11, 2019. [5] SANTOS, Wagner J. T. et al. Plos Neglected Tropical Diseases, [S.L.], v. 14, n. 7, p. 1-21, 27 jul. 2020. Public Library of Science