Avaliação da Microbiota Bacteriana do Solo em Cultivos Irrigados com Água de Reúsovoltar para a edição atual

1. JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA Atualmente, no Brasil e no Mundo, observam-se vários exemplos da utilização de água de reúso na agricultura (MANCUSO e SANTOS, 2013). A água de reúso é definida como a reutilização de águas, estas provenientes de efluentes tratados (MORAIS et al., 2016). A agricultura é a atividade econômica que mais demanda água, e devido à escassez das fontes hídricas para esta atividade em diversas regiões, a água de reúso se torna uma alternativa para enfrentamento desse problema (MANCUSO e SANTOS, 2013). A utilização de água de reúso traz diversos benefícios à agricultura como fonte de nutrientes que auxiliam o crescimento de cultivos e de água, entretanto deve-se ter segurança da qualidade sanitária para não prejudicar a saúde humana e ambiental. A água de reúso pode conter micropoluentes, tais como produtos químicos e microrganismos, podendo oferecer riscos à saúde pública e ambiental. A utilização da água de reúso na microbiota do solo podem ou não beneficiar microrganismos, variando de acordo com a quantidade aplicada e composição da água de reúso. Quando aplicada em alta quantidade e possuir uma grande carga de nutrientes como fósforo e nitrogênio, patógenos, metais pesados e antibióticos, o solo não consegue realizar a sua função de reciclabilidade, e assim pode alterar as características do solo (LIU et al., 2013). 2. OBJETIVOS 2.1 Objetivo Geral Analisar alterações na microbiota bacteriana do solo antes e após os ensaios de irrigação com água de reúso dos cultivos de hortaliças Petroselium sativum. 2.2 Objetivos Específicos • Avaliar alterações na microbiota bacteriana do solo antes e depois dos ensaios de rega de hortaliças Petroselinum sativum (salsa) com água de reúso; • Realizar a avaliação dos perfis de restrição por meio do programa BioNumerics. 3. METODOLOGIA Serão realizadas análises por meio método de polimorfismos de comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP) (DE LIMA et al., 2012). Para isto, o método de RFLP, será feito a partir das amostras já amplificadas por meio da PCR, e que passaram por digestão utilizando a endonuclease StuI, seguindo as orientações do fabricante (LIMA et al., 2012). Todas as amplificações foram avaliadas quanto à sua concentração de DNA por meio da análise da densidade óptica (DO) em espectrofotômetro, no comprimento de onda de 260 nm (EMBRAPA, 2007). O DNA digerido será analisado em gel horizontal a 3 % de agarose em tampão TBE (54 g Tris; 27,5 g de ácido bórico; 3,72 g EDTA; Água q.s.p. 1L; pH 8,0 - Tris Borato EDTA) 0,5X por 3 h, em voltagem constante de 75V (LIMA et al., 2012). Ao final da eletroforese, os fragmentos de DNA serão transferidos (Southern Blot) para membrana de nitrocelulose, e posteriormente será utilizada sonda rDNa 16s de Escherichia coli. A sonda será preparada através de PCR, e marcada com biotina, utilizando o kit de marcação da sonda BioNick™ DNA Labeling System da marca Invitrogen life Technologies (Cat. No.: 18247-015) seguindo as recomendações do fabricante. A pré-hibridização ocorrerá em 7 mL de solução DIG Easy Hyb a 65 °C, e a hibridização ocorrerá em 2,45 mL de solução DIG Easy Hyb a 70°C com exposição de 6 a 16 h. A membrana será lavada duas vezes em 2 X (vezes concentrado) SSC contendo 0,1% SDS em temperatura ambiente por 5 min e finalmente 0,5 X SSC contendo 0,1% SDS a 70°C duas vezes por 15 min. O substrato quimioluminescente será usado e os sinais visualizados em filme raio-X após 30 min (CARPENTIERI-PÍPOLO et al., 2008). As imagens serão analisadas por meio do programa BioNumerics® (versão 1.5, Applied Maths, Kortrijk, Bélgica) (PONTES JÚNIOR, 2010). A atividade de acesso ao Patrimônio Genético foi cadastrada no SisGen sob o nº AAC8F2F, em atendimento ao previsto na Lei nº 13.123/2015. CRONOGRAMA Atividades Duração (Mês) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Revisão da Literatura Método de RFLP Avaliação dos perfis de restrição por meio do programa BioNumerics Participação em Congresso Apresentação RAIC Relatório Parcial REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CARPENTIERI-PÍPOLO, V. et al. Comparison between methods of demarcation of probe of RFLP R2430E used in the selection of resistance of peanut to Meloidogyne arenaria. Semina: Ciências Agrárias, v. 29, n. 4, p. 783–788, 2008. EMBRAPA. Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de dna por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase. São Carlos: Embrapa Pecuária Sudeste, 2007. FRÓES, A. M. Mineração de dados metagenômicos visando a análise da diversidade de serina Beta-Lactamases em diferentes ambientes. 2013. 186f. Tese (Doutorado em Biologia Computacional e Sistemas) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de janeiro, RJ, 2013. LIMA, A. A. et al. Diversidade e capacidade simbiótica de rizóbios isolados de nódulos de Mucuna-Cinza e Mucuna-Anã. Revista Brasileira de Ciência do Solo, v. 36, n. 2, 2012. LIU, L. et al. Potential effect and accumulation of veterinary antibiotics in Phragmites australis under hydroponic conditions. Ecol. Eng., v. 53, p. 138–143. 2013. MANCUSO, P. C. S.; SANTOS H. F. Reúso de Água. Barueri, SP: Manole, 2013. MORAIS, M. A. et al. Contaminação microbiológica no perfil do solo por águas residuárias. Holos, v. 3, p. 76, 23 jun. 2016. PEREIRA, M. S. et al. Decaimento de Bactérias do Grupo Coliformes em Solos com Cobertura Vegetal e Nu. Revista Engenharia na Agricultura - REVENG, v. 22, n. 6, p. 575–582, 31 dez. 2014. PONTES JÚNIOR, M. D. Sucessão bacteriana durante o desenvolvimento de frutos de café (Coffea arabica L.). 2010.