Estudo do potencial uso de DNA aptâmeros para o diagnóstico diferencial para o herpesvírus humano tipo 8voltar para a edição atual

O herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) é um oncovírus do gênero Rhadinovirus. Este vírus compartilha um grande número de características morfológicas comuns aos outros herpesvírus, tais como: DNA dupla fita linear composto de 165 a 170 kb, com uma região central de 145 kb, capsídeo icosaédrico, tegumento entre o nucleocapsídeo e o envelope bilipídico, apresentando 100–150nm de diâmetro. O HHV-8 tem tropismo por linfócitos B e células endoteliais, onde permanece sob a forma latente epissomal extracromossômica ou pós estímulo sob a forma lítica citoplasmática. No estado latente apenas alguns genes do vírus são expressos, dentre eles destacamos o que codifica para a proteína associada a latência - LANA (codificada pela ORF73). No estado lítico, no qual partículas virais estão sendo produzidas, destacamos uma proteína de membrana denominada kaposina A (K-12), que é altamente expressa em todas as formas malignas associadas ao Sarcoma de Kaposi (SK). A infecção pelo HHV-8 está associada ao desenvolvimento de três tipos de tumores em pacientes imunocomprometidos. A saber, SK, linfomas de efusão primária e doença multicêntrica de Castleman. SK é caracterizado por tumores angioproliferativos multifocais e no mundo, entre 80 a 100% dos casos de SK estão associados ao HHV-8. Diagnosticar com precisão o estado de HHV-8 latente ou lítico em pacientes HIV positivos é de extrema relevância para impedir a progressão do SK nestes pacientes. Atualmente, o diagnóstico para HHV-8 pode ser realizado em fluido corporal através das técnicas de qPCR, hibridação in situ, imunohistoquímica de biópsias e imunofluorescência utilizando anticorpos anti-LANA. A detecção do estado lítico se dá da mesma forma e depende da localização. Os aptâmeros são moléculas de DNA ou RNA de fita simples, que adquirem conformação tridimencional específica e possui alta especificidade de ligação ao seu alvo. Eles podem ser selecionados pela metodologia de CELL SELEX (Evolução Sistemática de Ligantes por Enriquecimento Exponencial em células vivas), que se baseia no enriquecimento de uma biblioteca inicial de sequências aleatórias de aptâmeros. Desta forma, a presente proposta na área de desenvolvimento tecnológico será investigada em modelo de cultivo in vitro de linfócitos B (BCBL-1) e células endoteliais (EA.hy 926). BCBL-1 são células de linhagem humana obtidas de linfoma de células B com o genoma viral de HHV-8 inserido latentemente, sendo seu ciclo lítico estimulado pelo tratamento com PMA. EA.hy 926 são células endoteliais de linhagem humana estabelecidas pela fusão de células somáticas com células do cordão umbilical. Este modelo experimental mais próximo da biologia do tecido vivo, será utilizado para identificação de DNA aptâmeros com potencial de reconhecimento das células infectadas (diagnóstico); inibição da ativação do HHV-8 e com potencial de diferenciação de células apresentando o vírus em estado lítico e latente (terapia).