Validação de vias diferentemente moduladas em células da medula óssea de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum apresentando diferentes desfechos clínicosvoltar para a edição atual

Os cães infectados por L. infantum apresentam um espectro dinâmico de formas clínicas, que podem variar desde uma infecção subclínica até uma doença grave, podendo ser fatal. A progressão da leishmaniose visceral canina (LVC) depende de diversos fatores, entre eles, o tipo de resposta imune desencadeada após a infecção. O papel que a resposta imune desempenha no contexto da progressão e controle da LVC ainda não está completamente compreendido. Mais precisamente, o envolvimento da resposta imunecelular na patologia da doença não são bem esclarecidos. A MO é um dos tecidos de predileção da L. infantum e as células mielóides são uma das principais células hospedeiras do parasita. No entanto, o papel dessas células no desfecho clínico da LVC ainda é pouco estudado. Em razão da necessidade de esclarecer a importância da MO na patogênese da LVC, o objetivo do presente trabalho é validar vias diferentemente modulas identificadas em células da MO de cães resistentes e cães susceptíveis. Em estudo anterior, ainda não publicado, realizamos o sequenciamento de RNA total de células de MO de cães resistentes e susceptíveis selecionados de uma coorte com duração de 4 anos, realizada em área endêmica para LVC. Também foram incluídos no estudo cães controle não infectados por L. infatum. Em seguida ao sequenciamento, os dados brutos gerados foram mapeados e analisados por bioinformática, onde foram identificados genes diferentemente expressos (DEGs) em células da MO de cães resistentes e cães susceptíveis, quando comparados com células da MO de cães controle. Posteriormente foram feitas análises de enriquecimento de anotação de ontologia gênica e vias relacionadas à migração celular e ao reparo de quebra dupla de DNA foram identificadas como diferentemente modulas nas amostras obtidas de cães resistentes e susceptíveis. No presente estudo, os cães resistentes, os susceptíveis e os controles serão reavaliados e novas amostras biológicas serão coletadas para realização da validação das vias que foram anteriormente identificadas como diferentemente moduladas. As vias relacionadas a migração celular serão validadas por ensaios de migração realizados em placas de transwell e as vias relacionadas ao reparo de quebra dupla de DNA serão validadas por ensaios de cometa neutro. Validar essas vias irá contribuir para o melhor entendimento da patogênese da doença e na identificação de potenciais alvos imunoterapêuticos.