MAPEAMENTO GENÉTICO DE INDIVÍDUOS VACINADOS E INFECTADOS POR SARS-CoV-2voltar para a edição atual
Adrhyan Araújo da Silva Oliveira
Sob orientação de Deusilene Souza Vieira Dall'Acqua e ANA MAISA PASSOS DA SILVA
1. JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA
Para o maior entendimento da patologia, o estudo dos polimorfismos de
nucleotídeo único (SNPs) de ACE2 e TMPRSS2 podem interferir diretamente na
susceptibilidade sobre a infecção viral e o desenvolvimento da COVID-19 e além de
outras complicações, com isso, se faz necessário compreender melhor o perfil
genético dos indivíduos vacinados e infectados por SARS-CoV-2 para a visualização
dos possíveis influenciadores desse desenvolvimento patológico.
2. OBJETIVOS
? Determinar a carga viral;
? Detectar as variantes de amostras dos participantes do estudo para SARSCoV-2;
? Descrever o perfil epidemiológico e clínico da população de estudo;
? Padronizar reações de PCR para os marcadores genéticos;
? Descrever o perfil genético dos participantes do estudo;
? Avaliar a expressão gênica;
? Correlacionar a frequência da expressão desses genes com a maior
susceptibilidade ao desenvolvimento da COVID-19;
? Correlacionar os perfis virológicos e genéticos com o quadro clínico dos
indivíduos do estudo.
3. METODOLOGIA
3.1 TIPO E LOCAL DO ESTUDO
Trata-se de uma pesquisa com objetivo de mapear geneticamente a população
de indivíduos vacinados infectados pelo SARS-COV-2.
3.2 ASPECTOS ÉTICOS
Esta proposta foi submetida ao CEP/CEPEM e possui o parecer de aprovação
4.000.086.
3.3 POPULAÇÃO DE ESTUDO
Participarão do estudo 100 indivíduos com quadro de infecção para SARSCoV-2 com diagnóstico positivo para a técnica de RT-qPCR qualitativa, todos devem
estar vacinados.
3.4 COLETA DE AMOSTRAS
A coleta de amostra de sangue será por punção endovenosa em tubos de
EDTA e ativador de coágulo.
Para a coleta do swab nasofaringe será introduzido um swab pela narina até a
nasofaringe para coleta da secreção.
3.5 CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DOS POLIMORFISMOS DE
NUCLEOTÍDEO ÚNICO (SNPs)
3.5.1 Extração de DNA genômico
Para a realização do processo de extração do gDNA, será utilizado o kit
comercial de extração PureLink®Genomic DNA Mini Kit.
3.5.2 Reação em Cadeia da Polimerase
Serão utilizados kits comerciais de genotipagem humana para detecção dos
alelos e genótipos dos hospedeiros.
3.5.3 Caracterização molecular dos polimorfismos de nucleotídeo único
(SNPs)
Todas as amostras serão analisadas molecularmente a partir da otimização e
utilização de kits para a caracterização do perfil genético.
3.5.4 Determinação da Genotipagem Humana
Serão utilizados kits comerciais de genotipagem para os genes alvos.
3.5.5 Varredura de seleção
Será realizado o sequenciamento das amostras para análise de varredura de
seleção pelo software NGS relate.
3.6 EXPRESSÃO GÊNICA
A expressão dos genes candidatos será executada a partir de kits comerciais
utilizando amostras extraídas de mRNA.
3.7 AVALIAÇÃO DA RESPOSTA VIROLÓGICA
3.7.1 Identificação das variantes
Serão realizados ensaios para a detecção do RNA viral com oligonucleotídeos
específicos por meio da técnica de PCR em tempo real.
3.8 ANÁLISE ESTATÍSTICA
Para as análises estatísticas será utilizado o software de estatística RStudio e
GraphPad Prisma 8.4.0. ®. A correlação entre frequência de alélica será executada
através do teste do coeficiente de Spearman e do teste de Hardy-Weinberg