INVESTIGAÇÃO DA REPROGRAMAÇÃO METABÓLICA EM MONÓCITOS HUMANOS INFECTADOS POR LEISHMANIA AMAZONENSIS E LEISHMANIA BRAZILIENSIS voltar para a edição atual

A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por protozoários intracelulares de diversas espécies do gênero Leishmania . Essa doença tropical afeta milhões de pessoas em cerca de 88 países, sendo responsável por aproximadamente 70 mil óbitos anualmente. A Leishmania amazonensis apresenta-se tipicamente através da forma difusa, que envolve a disseminação para órgãos internos. Além disso, pode causar a forma cutânea localizada e em poucos casos a forma visceral . A forma na qual a doença irá se manifestar está diretamente relacionada com a espécie infectante e com a resposta imunológica do hospedeiro, todavia algumas espécies podem causar mais de um tipo de manifestação clínica . Durante a resposta imunológica, um dos desafios que as células do sistema imunológico enfrentam durante condições inflamatórias é a necessidade de energia para maturar e produzir biomoléculas 3 . As células do sistema imunológico, incluindo os monócitos, possuem diferentes requerimentos metabólicos e são alvos importantes na infecção por Leishmania spp, . A resposta imune está intrinsecamente relacionada com a atividade metabólica e a compreensão dos processos relacionados à essa interação na patogênese da Leishmaniose precisa ser melhor compreendido. Alguns patógenos intracelulares são capazes de modular o metabolismo de células hospedeiras, constituindo um dos mecanismos de escape da resposte imune e assim favorecendo seu crescimento e persistência no organismo hospedeiro. Diante disso, o objetivo desse estudo é avaliar a influência da infecção por Leishmania amazonenis no perfil metabólico em monócitos humanos. Estudos realizados pelo nosso grupo mostrou que mediante a infecção de macrófagos murinos derivados de medula óssea com Leishmania spp., ocorria um aumento do metabolismo mitocondrial, com elevação dos níveis de glicólise e fosforilação oxidativa. No entanto, em experimentos preliminares com macrófagos derivados de monócitos de sangue periférico humano, foi observada uma resposta contrária, com um aumento da glicólise e diminuição da fosforilação oxidativa após a infecção. Diante desse dado, fica nítida a importância de se investigar se existem diferenças entre os perfis metabólicos causados pela infecção com Leishmania spp. em células imunes de camundongos e humanos. Para isso, monócitos humanos derivados do sangue periférico de doadores da instituição serão coletados e posteriormente infectados com as formas promastigotas de L. amazonensis na proporção de 10 parasitas para 1 monócito, após a infecção será realizada analises da taxa de glicólise e fosforilação oxidativa através da mensuração da taxa de acidificação extracelular e taxa de consumo de oxigênio dos monócitos infectados e controles, através do aparelho SEAHORSE XF96 Extracellular Flux Analyzer. A carga parasitária e a taxa de infecção serão avaliadas mediante o tratamento prévio de 1 hora antes da infecção dos monócitos com os inibidores da via glicolítica e da fosforilação oxidativa. Além disso, a funcionalidade das mitocôndrias será avaliada através de sondas para dosagem de espécies reativas de oxigênio Cellrox (Thermo Fisher Scientific). A hipótese deste trabalho é que a infecção por L. amazonensis leva a reprogramação metabólica dos monócitos, acompanhada do aumento da atividade mitocondrial. Assim, com este estudo, espera-se elucidar como a Leishmania spp interfere no metabolismo de monócitos humanos. Devido ao fato de que L. amazonensis e L. braziliensis causam distintos tipos de resposta imune nos hospedeiros vertebrados, nossa hipótese é que as alterações provocadas por essas duas espécies de Leishmania no perfil metabólico dos monócitos humanos são divergentes, levando ao aumento da fosforilação oxidativa e glicólise respectivamente. Assim, com este estudo, espera-se elucidar como a infecção por Leishmania spp interferi no metabolismo de monócitos humanos.