Avaliação do efeito de moduladores do metabolismo lipídico em macrófagos estimulados com heme em modelo de anemia falciformevoltar para a edição atual

Introdução: A Anemia Falciforme é uma hemoglobinopatia autossômica recessiva, caracterizada pela presença da hemoglobina S (HbS). Sua patogênese está relacionada com a polimerização da HbS, vaso-oclusão e inflamação estéril com posteriores complicações e alterações sistêmicas. No entanto, a participação e o impacto do metabolismo lipídico na inflamação da AF permanecem pouco compreendida. Objetivo: Avaliar o impacto do tratamento com inibidores do metabolismo lipídico em macrófagos de medula de camundongos falcêmicos estimulados com heme. Metodologia: Serão utilizados macrófagos de medula obtidas de camundongos Townes HbAA (saudáveis) e HbSS (anêmicos) com 20 semanas. Os animais serão anestesiados, sacrificados e sua medula será extraída para cultura e diferenciação em macrófagos. Após a diferenciação, será realizado um ensaio de viabilidade celular com Alamar blue para definir as concentrações dos fármacos inibidores a serem utilizados. Definidos esses parâmetros, os macrófagos serão plaqueados com lamínulas, pré-tratados com os fármacos indometacina (inibidor da COX), zileuton (inibidor da 5-LO), C75 (inibidor da FASN) e TLR4-IN-C34 (inibidor do TLR-4), estimulados com heme e incubados por 6, 12 e 24h. Decorrido esse tempo, as lamínulas serão utilizadas para análise de corpúsculos lipídicos utilizando o coloração Oil Red O e para análise de co-localização dos corpúsculos com enzimas por imunofluorescência. As células terão seu RNA extraído para análises de expressão gênica por PCR em tempo real de enzimas relacionadas com síntese de mediadores lipídicos, e o sobrenadantes das culturas será utilizado para dosagem de eicosanoides tais como PGE2, LTB4, TXA2 e RvD1 por ensaio imunoenzimático. Os procedimentos que serão adotados foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal. As análises estatísticas serão realizadas utilizando o Graphpad Prism 8.0.2, e a diferença entre os valores serão consideradas estatisticamente significante quando p < 0,05. Resultados esperados: Espera-se que a modulação farmacológica investigada na presente pesquisa contribua para a identificação de novos alvos terapêuticos, bem como de moléculas com potencial para controlar a resposta inflamatória associada à anemia falciforme, o que será confirmado com testes in vivo, posteriormente.