Obtenção de antígeno recombinante de Leishmania spp. para o ensaio pré-clínico de Teste Intradérmico de Montenegro de Segunda Geração, em comparação com Teste Intradérmico de Montenegro de Primeira Geraçãovoltar para a edição atual

As leishmanioses compreendem um conjunto de doenças tropicais negligenciadas que afetam o mundo todo. No Brasil, a forma tegumentar da doença (Leishmaniose Tegumentar, LT) atinge mais de 25 mil pessoas por ano, com casos registados em todas as regiões. O diagnóstico laboratorial da LT pode ser parasitológico, imunológico e molecular. Entretanto, a pouca quantidade de parasitos nas lesões pode dificultar o diagnóstico parasitológico confirmatório, e testes moleculares como a PCR têm apresentado aplicação restrita devido à dificuldade no acesso e execução à campo. A Intradermorreação de Montenegro (IDRM), que se baseia na resposta imune do tipo celular tardia, é um teste acessível, de fácil execução e que apresenta sensibilidade de até 100%. Sua produção, todavia, foi recentemente interrompida no mundo todo. Deste modo, o presente subprojeto tem por objetivo a obtenção e purificação de um antígeno recombinante de Leishmania spp., o qual será utilizado para ensaio pré-clínico de Teste de Intradermorreação de Montenegro de Segunda Geração em cobaias (Cavia porcellus), em análise comparativa com o antígeno de Montenegro de Primeira Geração. Para a obtenção do antígeno recombinante, será realizada a clonagem do gene que codifica a proteína candidata à antígeno recombinante. Em seguida, será realizada a expressão do antígeno recombinante em bactéria e sua purificação. O estudo pré-clinico será composto de duas etapas, realizadas em grupo de 16 cobaias (Cavia porcellus) (Projeto aprovado CEUA/ Tecpar protocolo no 001/2022). Primeiramente, os animais serão imunizados com concentrado de L. brasiliensis (n=8) e L. amazonensis (n=8). Após 30 dias da imunização, será realizada a inoculação de 100 ?l do antígeno recombinante purificado obtido (n=6, sendo 3 imunizados com L. brasiliensis e 3 com L. amazonensis), a realização de IDRM de Primeira Geração (n=6, sendo 3 imunizados com L. brasiliensis e 3 com L. amazonensis), e a inoculação de 100 ?l de solução fenolada 0,4% isenta de parasitas no controle (n=2, sendo 1 imunizado com L. brasiliensis e 1 com L. amazonensis). Após as 72 horas da inoculação, os animais serão eutanasiados e submetidos à análise in vivo das endurações, e à biópsia dos fragmentos teciduais nos locais das inoculações/ endurações para avaliação histopatológica e imunohistoquímica. Os dados obtidos neste grupo serão analisados estatisticamente. Como resultado esperado, somando-se à publicação de artigo científico em periódico de impacto internacional, espera-se a padronização deste antígeno para realização de Teste Intradérmico de Montenegro de Segunda Geração. Este produto vem ao encontro à demanda existente para o adequado, eficiente, fácil, seguro e específico diagnóstico, tratamento e controle da Leishmaniose Tegumentar no Brasil.