Caracterização polifásica de linhagens do complexo Burkholderia cepacia isoladas de uma indústria de imunobiológicos no Estado do Rio de Janeirovoltar para a edição atual

O Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos), é um dos maiores centros de produção de imunobiológicos da América Latina, garantindo a autossuficiência em vacinas do Programa Nacional de Imunizações. O cumprimento das Boas Práticas de Fabricação visa à diminuição dos riscos inerentes a qualquer produção farmacêutica, como por exemplo, a contaminação microbiana. Metodologias voltadas à identificação microbiana na indústria farmacêutica têm sido avaliadas a fim de se reduzir custos, reduzir a sensibilidade dos métodos, e aumentar a confiabilidade dos resultados obtidos, pois muitas das técnicas atualmente utilizadas não são capazes de identificar determinadas espécies bacterianas isoladas de ambientes de produção farmacêutica. Burkholderia spp. é considerado um contaminante de grande relevância na Indústria Farmacêutica, por ser isolado com frequência de sistemas de água, além de já ter sido isolado de produtos estéreis e não estéreis, ocasionando o recolhimento de medicamentos do mercado. A fabricação de produtos estéreis exige um alto nível de sanitização e higiene em todas as suas etapas, incluindo pessoal, instalações, equipamentos e utensílios. As áreas de produção devem ser monitoradas regularmente para a detecção de microrganismos resistentes, logo os desinfetantes utilizados devem ter sua eficácia comprovada. Contudo, mesmo seguindo estes procedimentos, a formação de biofilmes em equipamentos e nas áreas de produção é um fator crítico e preocupante na indústria, pois muitas vezes os micro-organismos desenvolvem tolerância a diversos biocidas devido à pressão seletiva, o que dificulta a eliminação destes. O objetivo deste projeto é realizar uma caracterização polifásica de linhagens do complexo Burkholderia cepacia (CBc) isoladas de uma indústria de imunobiológicos localizada no Estado do Rio de Janeiro. O perfil fenotípico de 400 linhagens previamente identificadas como CBc pelo sistema semiautomatizado VITEK 2 serão compilados em forma de planilha no Programa Microsft Excel 2013 e avaliadas pelo cálculo do coeficiente de similaridade utilizando a correlação de Pearson e método de Unweighted Pair-Group Method using Arithmetic Avarages com uso do software Bionumerics v. 8.1. Em seguida, linhagens dos perfis mais prevalente serão selecionadas e submetidas a caracterização proteômica por Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight/Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) com uso do VITEK MS RUO seguindo as instruções do fabricante. Posteriormente, será realizado o sequenciamento completo do gene 16S rRNA pelo método de Sanger com o kit MicroSEQ Full Gene 16S rRNA conforme as instruções do fabricante. As sequências serão analisadas com software DNA Star LaserGene SeqMan v.7.0.0 e as sequências consenso serão depositadas no banco de dados do National Center for Biotechnology Information. Os resultados de identificação serão obtidos por comparação com as sequências depositadas no banco de dados EZBioCloud (https://www.ezbiocloud.net/). Serão considerados como possibilidades de espécie, resultados que apresentarem um percentual de identificação maior ou igual 98,7 percentual. A tipificação por Multi-locus sequence typing (MLST) será realizada pelo sequenciamento dos sete genes housekeeping (atpD, gltB, gyrB, recA, lepA, phaC e trpB) de acordo com o protocolo descrito no banco de dados do pubMLST. A partir da avaliação das relações genéticas e das características fenotípicas das linhagens serão determinados o(s) clone(s) mais prevalentes. Espera-se a criação de um banco de dados com o perfil epidemiológico das linhagens, para uso como ferramenta de avaliação de risco mais robusta em Bio-Manguinhos.