ESTUDO DA ATIVIDADE CITOTÓXICA DE UM INIBIDOR DE GLI-1 EM MODELO 3D DE CARCINOMA ORAL DE CÉLULAS ESCAMOSAS voltar para a edição atual

Apesar dos avanços nos estudos sobre o Carcinoma oral de Células Escamosas (COCE), as opções de tratamento limitadas resultam em altas taxas de morbidade e piora na qualidade de vida dos pacientes. Considerando-se os desafios relacionados ao desfecho clínico e sobrevida para os pacientes com COCE e, alinhado ao conhecimento de que a reativação de vias de sinalização embrionárias é importante para a iniciação tumoral e para a manutenção da população de células tronco, com reflexos na resistência a fármacos, a nossa equipe dedica-se ao estudo da via Hedgehog (HH) em carcinoma oral de células escamosas, desde 2010. O GANT 61 é um inibidor promissor que atua de forma downstream na via HH, inibindo a transcrição mediada por GLI-1 e GLI-2. Desta forma, o objetivo do projeto é avaliar os efeitos do GANT61 na viabilidade, proliferação e morte celular em modelo 3D de carcinoma oral de células escamosas. A linhagem tumoral metastática de carcinoma escamocelular oral de língua HSC3 (JCRB Cell Bank, JCRB0623) está sendo utilizada neste estudo. Os nossos resultados preliminares validaram os esferóides como um bom modelo de estudo e os valores da EC50 (concentração efetiva do fármaco) do GANT61 são promissores. Desta forma, nas próximas etapas avaliaremos o efeito deste composto na morte celular por apoptose e invasão. Os esferóides serão plaqueados em placas de 96 poços, opacas e repelentes e tratados com o GANT61, o controle positivo (cisplatina) e negativo (DMSO), por 24 e 48h. Em seguida, serão incubados com o kit Caspase-Glo 3/7 3D (Promega). Serão realizados três experimentos independentes em triplicata e o teste ANOVA seguido pelo teste de Student Newman-Keuls serão aplicados para avaliação dos grupos do ensaio. Os efeitos deste composto na morfologia dos esferóides também serão avaliados através de análises das imagens obtidas a partir de microscopia de campo claro (EVOS XL). O diâmetro será medido através do programa Image J, durante os intervalos de 3h, 6h, 12h, 24h, 48h e 72h. A avaliação será realizada em triplicata, juntamente com os grupos de controle negativo (DMSO) e positivo (cisplatina), em três ensaios independentes. Ainda, o efeito do GANT61 na invasão celular será avaliado em câmaras Transwell de 24 poços, após 24h de tratamento. Para ensaios de invasão, 3 esferóides serão incubados por poço na membrana basal reconstituída com, ou sem tratamento, por 24h. O número de células será quantificado em um Coulter Counter ZII. Todas as quantificações serão realizadas em triplicata. A análise estatística será feita pelo teste t de Student, e o nível de significância será estabelecido em P <0,05.