Caracterização dos fragmentos de sinalização nuclear das GP63 em promastigotas e amastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis voltar para a edição atual

As leishmanioses são doenças causadas por um protozoário intracelular pertencente à família Trypanosomatidae do gênero Leishmania. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), a leishmaniose é uma das sete doenças tropicais mais importantes da atualidade, sendo, no entanto, considerada negligenciada. Devido a isto, essa doença que possui um amplo espectro de manifestações clínicas com uma resolução potencialmente fatal, representa um sério problema para o sistema de saúde no mundo. As leishmanioses são doenças com distribuição mundial encontradas em cerca de 89 países, sendo endêmicas na Ásia, África, Américas e região do Mediterrâneo. De acordo com o informe epidemiológico da Organização Pan-Americana de Saúde (OPAS/OMS) publicado em dezembro de 2019, foram registrados um total de 989.096 casos de LC e LMC no período de 2001-2018, com uma média anual de 54.950 casos reportados. Do total de casos de 2018, 84% foram reportados pelo Brasil. Esse quadro de infecção no país assume um cenário particular, onde as principais espécies relacionadas são: Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis e Leishmania (Leishmania) amazonensis. Dentre estas espécies, a Leishmania (Viannia) braziliensis é a espécie mais prevalente no Brasil e pode causar lesões cutâneas e mucosas, sendo assim o principal agente etiológico da Leishmaniose Tegumentar nas Américas. É encontrada desde o Norte até o Sul do Brasil, tanto em áreas de colonizações antigas ou recentes. Neste contexto, Leishmania spp apresenta grande plasticidade na relação parasito hospedeiro e as proteases são fatores de virulência que exercem papéis fundamentais no ciclo de vida do parasito. Estão presentes aproximadamente 2% no genoma do parasita. Este quantitativo engloba as principais classes de proteases: cisteína-proteases, serina-proteases, aspartil-proteases e metalo-proteases. Em Leishmania (Viannia) braziliensis, 52% dos alelos de proteases são representados por metaloproteases. Esse quantitativo de genes abrange as glicoproteínas 63 (GP63), enzimas que pertencem à classe de leishmanolisina, um importante fator de virulência. A GP63 de Leishmania spp. é internalizada pelos macrófagos do hospedeiro mamífero independente da fagocitose. O processo de internalização pode ocorrer pela interação entre a âncora GPI da GP63 secretada e as balsas lipídicas da membrana celular dos macrófagos. Já na região intracelular, a GP63 pode ser transportada ao núcleo pelo reconhecimento do motivo de direcionamento nuclear presente na sequência da GP63. Esta sequência geralmente consiste em cadeias de aminoácidos básicos com motivo de assinatura K-K/R-X-K/R. No núcleo celular a GP63 pode atuar nas subunidades da proteína-1 ativada alterando sua capacidade de ligação ao DNA. Devido a função crítica deste fator de transcrição sob vários genes envolvidos na resposta imune inata há uma regulação negativa das funções imunes inatas. Portanto, a GP63 demonstra um importante mecanismo de evasão ao sistema imune do hospedeiro mamífero, permitindo a adaptação do parasito ao ambiente intracelular e contribuindo, desta forma, a sua sobrevivência e propagação. Objetivo: Identificar e caracterizar as GP63 da Leishmania (Viannia) braziliensis que atuam diretamente no núcleo celular dos macrófagos. Metodologia: Inicialmente realizamos análises in sílico para mapear motivos NLS em GP63 e desenho dos iniciadores. As sequencias de GP63 foram obtidas pelo servidor TriTrypDB (https://tritrypdb.org/tritrypdb/app/) e alinhadas pelos servidores MAFFT (https://mafft.cbrc.jp/alignment/server/) e BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/). Após a caracterização foi possível desenhar os iniciadores utilizando o NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) e confirmados pelo IDT (https://www.idtdna.com/pages) Resultados: A partir das análises realizadas, identificamos doze sequencias de GP63 com o motivo NLS e cinco sequencias foram confirmadas no transcriptoma de Leishmania (V.) braziliensis. Além disso, determinamos iniciadores individuais para cada gene de GP63. Conclusão: De maneira geral, as GP63 de L. (V.) braziliensis apresentam motivos NLS com alto grau de identidade estrutural entre si. No entanto, apenas cinco sequencias foram identificadas no transcriptoma de Leishmania (V.) braziliensis. Contudo, foi possível propor pares de iniciadores específicos para cada sequência de GP63 como motivo NLS.